过表达稳定细胞系(Overexpression Stable Cell Lines)的构建利用慢病毒感染、电转等技术手段将特定的基因序列整合到宿主细胞的染色体上,使得目的基因能够在宿主细胞内长期且稳定的表达。
目前常用的构建稳定细胞系的基本原理是将外源DNA克隆到具有某种抗性的载体上,载体被转染到宿主细胞并整合到宿主染色体中,用载体中所含的抗性标志进行筛选。最常用的真核表达载体的抗性筛选标志物有嘌呤霉素(puromycin)、杀稻瘟菌素(Blasticidin S)、潮霉素(hygromycin)和新霉素(neomycin),常用G418来代替新霉素进行选择性筛选。通过筛选得到可稳定表达目的蛋白,或者稳定表达沉默特定基因的细胞株。
慢病毒几乎可以感染所有种类的细胞,并且在感染后可以整合到受感染细胞的基因组,进行长时间的稳定表达,因此,慢病毒常用于制备稳定表达/沉默特定基因的单克隆细胞株。
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