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敲除细胞系构建服务
简介

CRISPR(clustered, regμlarly interspaced, short palindromic repeats)是一种来自细菌降解入侵的病毒DNA或其他外源DNA的免疫机制。在该机制中,Cas蛋白 (CRISP‐associated protein)含有两个核酸酶结构域,可以分别切割两条DNA链。一旦与crRNA(CRISPR RNA)和tracrRNA结合形成复合物,Cas蛋白中的核酸酶即可对与复合物结合的DNA进行切割。切割后DNA双链断裂从而使入侵的外源DNA降解。来自Streptococcus pyogenes的Cas9由于PAM识别序列仅为2个碱基(GG),几乎可以在所有的基因中找到大量靶点, 因此得到广泛的应用。Cas9蛋白在目前测试过的几乎所有生物和细胞中均有活性,包括细菌、酵母、植物、鱼、以及哺乳动物细胞。识别 RNA(gRNA)可以通过载体表达或者化学合成后与Cas9蛋白共同进入细胞,对特异DNA序列剪切,从而促使DNA发生 NHEJ(nonhomologous end‐joining)导致的基因缺失或同源重组,实现基因敲除。

吉满生物研发团队拥有丰富的细胞系构建和基因编辑项目经验,致力于为广大客户提供定制的基因编辑细胞系构建服务。

我们的服务涵盖基因敲除细胞系、条件敲除细胞系、基因敲入细胞系、定点突变细胞系、基因激活/抑制细胞系等。基于高效稳定的细胞转染系统和基因编辑系统,我们成功在不同细胞系实现基因编辑,包括但不限于易转染细胞或难转染肿瘤细胞、神经细胞、干细胞和其他细胞。


敲除原理.png

敲除细胞系原理图

特点

CRISPR/Cas9系统已经成为基因编辑的有力工具,用于准确、高效地编辑生物体的基因组。在基因研究、基因治疗和基因育种等方面展示出了巨大的应用前景。运用CRISPR技术实现基因编辑,需要将CRISPR/Cas9系统的两个核心元素sgRNA和Cas9蛋白递送到细胞内,目前主要有三种递送形式:

(1)质粒瞬转:采用分别表达sgRNA和Cas9的DNA质粒(或sgRNA和cas9共表达质粒)共转染细胞,在细胞内通过质粒瞬时表达gRNA和Cas9蛋白,进而实现对靶基因的编辑。

(2)RNA瞬转:体外合成sgRNA和表达Cas9蛋白的mRNA,通过瞬时转染技术将两者递送至细胞内,Cas9的mRNA可由细胞翻译合成Cas9蛋白,进而实现对靶基因编辑。

(3)蛋白瞬转(RNP):体外将Cas9蛋白和sgRNA混合,二者可以结合形成核糖核蛋白(ribonucleoprotein, RNP),然后通过瞬时转染技术(脂质体或电转等)可将RNP复合效应物递送到细胞内,进而实现对靶基因的编辑。

根据递送形式以及不同的细胞,可以选择不同的递送方法,主要包括:物理方法、化学方法、以及病毒转导。其中,利用慢病毒转导质粒和电穿孔递送RNP是将CRISPR/Cas9导入细胞的两种主要方法。

吉满生物可以为客户提供基因编辑相关的现货细胞株以及细胞株构建服务。

服务流程
优势

(1)吉满生物专注提供病毒包装服务十余年,稳定细胞系构建服务经验丰富!

(2)吉满生物构建的稳定细胞系种子优良,性状稳定,活力无损!

(3)ISO9001认证的质量体系,严格的病毒纯化工艺!

(4)上万篇SCI期刊引用,包括Cell、Science、Nature等顶级期刊!

(5)完善的客户服务体系,技术支持、项目跟进、售后服务获得客户一致好评,确保您订购无忧!

案例展示
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敲除细胞系构建服务
简介

CRISPR(clustered, regμlarly interspaced, short palindromic repeats)是一种来自细菌降解入侵的病毒DNA或其他外源DNA的免疫机制。在该机制中,Cas蛋白 (CRISP‐associated protein)含有两个核酸酶结构域,可以分别切割两条DNA链。一旦与crRNA(CRISPR RNA)和tracrRNA结合形成复合物,Cas蛋白中的核酸酶即可对与复合物结合的DNA进行切割。切割后DNA双链断裂从而使入侵的外源DNA降解。来自Streptococcus pyogenes的Cas9由于PAM识别序列仅为2个碱基(GG),几乎可以在所有的基因中找到大量靶点, 因此得到广泛的应用。Cas9蛋白在目前测试过的几乎所有生物和细胞中均有活性,包括细菌、酵母、植物、鱼、以及哺乳动物细胞。识别 RNA(gRNA)可以通过载体表达或者化学合成后与Cas9蛋白共同进入细胞,对特异DNA序列剪切,从而促使DNA发生 NHEJ(nonhomologous end‐joining)导致的基因缺失或同源重组,实现基因敲除。

吉满生物研发团队拥有丰富的细胞系构建和基因编辑项目经验,致力于为广大客户提供定制的基因编辑细胞系构建服务。

我们的服务涵盖基因敲除细胞系、条件敲除细胞系、基因敲入细胞系、定点突变细胞系、基因激活/抑制细胞系等。基于高效稳定的细胞转染系统和基因编辑系统,我们成功在不同细胞系实现基因编辑,包括但不限于易转染细胞或难转染肿瘤细胞、神经细胞、干细胞和其他细胞。


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敲除细胞系原理图

特点

CRISPR/Cas9系统已经成为基因编辑的有力工具,用于准确、高效地编辑生物体的基因组。在基因研究、基因治疗和基因育种等方面展示出了巨大的应用前景。运用CRISPR技术实现基因编辑,需要将CRISPR/Cas9系统的两个核心元素sgRNA和Cas9蛋白递送到细胞内,目前主要有三种递送形式:

(1)质粒瞬转:采用分别表达sgRNA和Cas9的DNA质粒(或sgRNA和cas9共表达质粒)共转染细胞,在细胞内通过质粒瞬时表达gRNA和Cas9蛋白,进而实现对靶基因的编辑。

(2)RNA瞬转:体外合成sgRNA和表达Cas9蛋白的mRNA,通过瞬时转染技术将两者递送至细胞内,Cas9的mRNA可由细胞翻译合成Cas9蛋白,进而实现对靶基因编辑。

(3)蛋白瞬转(RNP):体外将Cas9蛋白和sgRNA混合,二者可以结合形成核糖核蛋白(ribonucleoprotein, RNP),然后通过瞬时转染技术(脂质体或电转等)可将RNP复合效应物递送到细胞内,进而实现对靶基因的编辑。

根据递送形式以及不同的细胞,可以选择不同的递送方法,主要包括:物理方法、化学方法、以及病毒转导。其中,利用慢病毒转导质粒和电穿孔递送RNP是将CRISPR/Cas9导入细胞的两种主要方法。

吉满生物可以为客户提供基因编辑相关的现货细胞株以及细胞株构建服务。

服务流程
优势

(1)吉满生物专注提供病毒包装服务十余年,稳定细胞系构建服务经验丰富!

(2)吉满生物构建的稳定细胞系种子优良,性状稳定,活力无损!

(3)ISO9001认证的质量体系,严格的病毒纯化工艺!

(4)上万篇SCI期刊引用,包括Cell、Science、Nature等顶级期刊!

(5)完善的客户服务体系,技术支持、项目跟进、售后服务获得客户一致好评,确保您订购无忧!

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