CRISPR(clustered, regμlarly interspaced, short palindromic repeats)是一种来自细菌降解入侵的病毒DNA或其他外源DNA的免疫机制。在该机制中,Cas蛋白 (CRISP‐associated protein)含有两个核酸酶结构域,可以分别切割两条DNA链。一旦与crRNA(CRISPR RNA)和tracrRNA结合形成复合物,Cas蛋白中的核酸酶即可对与复合物结合的DNA进行切割。切割后DNA双链断裂从而使入侵的外源DNA降解。来自Streptococcus pyogenes的Cas9由于PAM识别序列仅为2个碱基(GG),几乎可以在所有的基因中找到大量靶点, 因此得到广泛的应用。Cas9蛋白在目前测试过的几乎所有生物和细胞中均有活性,包括细菌、酵母、植物、鱼、以及哺乳动物细胞。识别 RNA(gRNA)可以通过载体表达或者化学合成后与Cas9蛋白共同进入细胞,对特异DNA序列剪切,从而促使DNA发生 NHEJ(nonhomologous end‐joining)导致的基因缺失或同源重组,实现基因敲除。
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我们的服务涵盖基因敲除细胞系、条件敲除细胞系、基因敲入细胞系、定点突变细胞系、基因激活/抑制细胞系等。基于高效稳定的细胞转染系统和基因编辑系统,我们成功在不同细胞系实现基因编辑,包括但不限于易转染细胞或难转染肿瘤细胞、神经细胞、干细胞和其他细胞。
敲除细胞系原理图