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干扰质粒构建
简介

根据客户研究的目的基因设计shRNA,并将其克隆到相应的载体,转染细胞即可实现抑制基因表达的目的;与化学合成的siRNA相比,质粒性质更稳定,且对基因的抑制持续时间更长。

RNA干扰现象是一种进化上保守的抵御转基因或外来病毒侵犯的防御机制,将与靶基因的转录产物mRNA存在同源互补序列的双链RNA导入细胞后,能特异性地降解该mRNA,从而产生相应的功能表型缺失。

RNAi提供了一种经济、快捷、高效的抑制特异基因表达的技术手段,使用RNAi技术可以特异性剔除或关闭特定基因的表达,有助于研究该基因在生物模型系统中的作用,是研究基因功能的重要工具,并且逐步成为病毒性疾病、遗传性疾病以及肿瘤等的基因治疗研究的一种手段。

特点

shRNA是可以克隆至表达载体并表达双链siRNA的RNA分子,包括两个短反向重复序列,中间由一茎环序列分隔,形成发夹结构,由polⅢ启动子控制。相对于siRNA,shRNA在细胞核中合成,进一步加工并运输到细胞质中,然后进入RISC发挥活性。miRNA的合成与成熟研究为shRNA的合成,特别是基于miR-30的shRNA的合成提供了基础。

shRNA表达载体进入细胞质后,需要转运到细胞核中进行转录。初级转录本(Pri-shRNA)由Drosha/DGCR8复合物处理形成pre-shRNA。Pre-shRNA被运输到细胞质中,装载到Dicer/TRBP/PACT复合物上,随后被进一步加工成成熟的shRNA。成熟shRNA与含有RISC的Argonaute蛋白相关,介导mRNA的切割和降解或处理小体(P-bodies)的翻译抑制,行使RNA干扰功能。

服务流程
优势

(1)吉满生物具有专业的技术研究团队和丰富的分子克隆经验;

(2)吉满生物目前已有多种工具载体可选,应用于各种表达系统;

(3)可根据客户需求构建不同的目的载体。

案例展示
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干扰质粒构建
简介

根据客户研究的目的基因设计shRNA,并将其克隆到相应的载体,转染细胞即可实现抑制基因表达的目的;与化学合成的siRNA相比,质粒性质更稳定,且对基因的抑制持续时间更长。

RNA干扰现象是一种进化上保守的抵御转基因或外来病毒侵犯的防御机制,将与靶基因的转录产物mRNA存在同源互补序列的双链RNA导入细胞后,能特异性地降解该mRNA,从而产生相应的功能表型缺失。

RNAi提供了一种经济、快捷、高效的抑制特异基因表达的技术手段,使用RNAi技术可以特异性剔除或关闭特定基因的表达,有助于研究该基因在生物模型系统中的作用,是研究基因功能的重要工具,并且逐步成为病毒性疾病、遗传性疾病以及肿瘤等的基因治疗研究的一种手段。

特点

shRNA是可以克隆至表达载体并表达双链siRNA的RNA分子,包括两个短反向重复序列,中间由一茎环序列分隔,形成发夹结构,由polⅢ启动子控制。相对于siRNA,shRNA在细胞核中合成,进一步加工并运输到细胞质中,然后进入RISC发挥活性。miRNA的合成与成熟研究为shRNA的合成,特别是基于miR-30的shRNA的合成提供了基础。

shRNA表达载体进入细胞质后,需要转运到细胞核中进行转录。初级转录本(Pri-shRNA)由Drosha/DGCR8复合物处理形成pre-shRNA。Pre-shRNA被运输到细胞质中,装载到Dicer/TRBP/PACT复合物上,随后被进一步加工成成熟的shRNA。成熟shRNA与含有RISC的Argonaute蛋白相关,介导mRNA的切割和降解或处理小体(P-bodies)的翻译抑制,行使RNA干扰功能。

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优势

(1)吉满生物具有专业的技术研究团队和丰富的分子克隆经验;

(2)吉满生物目前已有多种工具载体可选,应用于各种表达系统;

(3)可根据客户需求构建不同的目的载体。

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